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探秘蛋白質(zhì)的“前世今生” —國家蛋白質(zhì)科學(xué)中心·上海

更新時間:2016-10-13點擊次數(shù):2997

圖為蛋白質(zhì)科學(xué)研究(上海)設(shè)施核磁共振分析系統(tǒng)。

  生活中的烏云總是不期而至。一位正值花季的美國女孩,突然被告知患上了一種非常難治的癌癥?;驒z測結(jié)果顯示,她所患癌癥的亞型發(fā)生率極低。

  在患同一大類癌癥的人群中,只有2%的人所患亞型和她一樣。幸運的是,針對這一亞型恰好有一種藥。經(jīng)過不到3個月的治療,她*了。

  國家蛋白質(zhì)科學(xué)中心·上海(籌)主任雷鳴用這個真實的案例,向科技日報記者生動闡釋了醫(yī)療的未來圖景。但并非所有的癌癥患者都和那位女孩一樣幸運。在人類通往醫(yī)療的道路上,蛋白質(zhì)科學(xué)研究將扮演什么角色?身為國家大科學(xué)工程之一的蛋白質(zhì)科學(xué)研究(上海)設(shè)施(以下簡稱“上海設(shè)施”)對推進蛋白質(zhì)科學(xué)研究將起到怎樣的作用?

  為回答這些問題,科技日報記者近日走進國家蛋白質(zhì)科學(xué)中心·上海(籌)一探究竟。

  不容小覷的“儀器集群”

  和以往走進的國家大科學(xué)工程相比,上海設(shè)施沒能在視覺上給人造成強大沖擊。

  “我們這里主要是一些體量相對較小的生命科學(xué)研究的儀器集群,以至于在立項之初,是否將上海設(shè)施列入大科學(xué)工程都存在爭議。”雷鳴說道。

  可別小瞧這里的“儀器集群”。上海設(shè)施自2014年5月試運行以來,前來參觀的10多位諾貝爾獎得主和其他專家對設(shè)備的先進性紛紛“點贊”。

  雷鳴回憶道,十多年前,我國在蛋白質(zhì)科學(xué)研究領(lǐng)域雖然已取得一批達到*水平的研究成果,但整體上仍落后于先進水平??蒲谢A(chǔ)設(shè)施建設(shè)滯后,是制約蛋白質(zhì)科學(xué)發(fā)展的關(guān)鍵因素。

  在科學(xué)家們的不懈努力下,蛋白質(zhì)科學(xué)研究設(shè)施國家重大科技基礎(chǔ)設(shè)施項目于2008年被批準(zhǔn)立項,成為我國生命科學(xué)領(lǐng)域*個大科學(xué)工程項目。蛋白質(zhì)科學(xué)研究設(shè)施分為上海和北京兩部分,上海設(shè)施以建設(shè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析能力為主。

  圍繞從生物體的空間尺度和生命過程的時間尺度來研究蛋白質(zhì),上海設(shè)施構(gòu)建了由規(guī)模化蛋白質(zhì)制備系統(tǒng)、蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)分析系統(tǒng)、核磁分析系統(tǒng)、集成化電鏡分析系統(tǒng)、蛋白質(zhì)動態(tài)分析系統(tǒng)、質(zhì)譜分析系統(tǒng)、復(fù)合激光顯微成像系統(tǒng)、分子影像系統(tǒng)和數(shù)據(jù)庫與計算分析系統(tǒng)組成的9大技術(shù)系統(tǒng),具備規(guī)模化蛋白質(zhì)制備、多尺度結(jié)構(gòu)分析、多層次動態(tài)研究、修飾與相互作用分析以及數(shù)據(jù)庫與計算分析5大能力。

  史蒂夫·哈里森是雷鳴在哈佛大學(xué)讀博士時的導(dǎo)師。參觀上海設(shè)施后,史蒂夫感覺非常震撼,對雷鳴很年輕就有機會參與如此重大的項目表示贊賞和羨慕。收獲羨慕之余,雷鳴多次被問道:“在如此先進的科研平臺上,你們能做出哪些世界*的工作來?”

  *的蛋白質(zhì)“智能工廠”

  每一個蛋白質(zhì)就像一個人一樣,有自己的脾氣秉性。要把它研究透徹,需要時間。

  上世紀(jì)六七十年代有句話叫“one protein,one career”,意為一個教授一輩子只能研究透一個蛋白質(zhì)。“我主要研究端粒,從評上教授到現(xiàn)在,也只解析了數(shù)十個蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。”雷鳴說道。

  要摸清蛋白質(zhì)的“脾氣”,首先是要獲取高純度的蛋白質(zhì)樣品。想見到蛋白質(zhì)的“真身”,就必須打破細胞。而細胞一旦被打破,里面90%的蛋白質(zhì)就同時被破壞掉了,蹤跡難覓。

  找到目標(biāo)蛋白質(zhì)后,保存也是個難題。相對于“皮實”的基因,蛋白質(zhì)要“嬌氣”得多。記載遺傳信息的基因就像是張可以隨意擺放的卡片,沒有變性的擔(dān)憂。蛋白質(zhì)則不同,一旦溫度、濕度、光線等環(huán)境因素發(fā)生變化,就會有變質(zhì)的風(fēng)險。

  在傳統(tǒng)的生物學(xué)實驗室里,穿著白大褂的科研人員手持移液槍,往裝有不同液體的瓶瓶罐罐里添加試劑是常見的場景。在上海設(shè)施的規(guī)?;鞍踪|(zhì)制備系統(tǒng)里,這一幕正在被自動化的機器操作所取代。

  高通量克隆構(gòu)建實驗室的中心區(qū)域是一個用玻璃超凈間封閉起來的自動化機械操作平臺。操作臺外有一臺集成軟件的計算機負(fù)責(zé)“發(fā)號施令”??蒲腥藛T啟動預(yù)設(shè)程序后,白色的機械臂在平臺的各個自動化儀器間來回挪動,輕巧地把一個個96孔板放置到的板位上。各個自動化儀器的板位分別可執(zhí)行加液、振蕩、離心、清洗等生物實驗操作。

  傳統(tǒng)手工操作,一個人每天zui多克隆十幾個基因。眼前的這套自動化系統(tǒng),一天可以克隆960個基因,生產(chǎn)效率相當(dāng)于一個數(shù)百人規(guī)模的基因克隆企業(yè)。“我們希望把自動化概念引入科研中,重復(fù)勞動讓機器來做,科研人員可以有更多的時間去探索和思考真正的科學(xué)問題。”規(guī)?;鞍踪|(zhì)制備系統(tǒng)主管鄧瑋告訴記者。

  上海設(shè)施自主設(shè)計和研發(fā)應(yīng)用流程的這套系統(tǒng),如同“智能工廠”一般,能獨立完成一整套從分子生物學(xué)到細胞生物學(xué)的全部實驗操作。

  “集成化程度越高的自動化設(shè)備,出錯的幾率就越高。針對*陌生的樣品,我們這套系統(tǒng)的可靠性能達到70%,這已經(jīng)是一個非常不錯的結(jié)果了。”雷鳴表示。

  五線六站 透視蛋白質(zhì)內(nèi)部結(jié)構(gòu)

  蛋白質(zhì)并不是由松散的氨基酸隨機排列組合而成,每一種天然蛋白質(zhì)都有自己特定的空間結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)決定著蛋白質(zhì)的功能。

  肌紅蛋白是哺乳動物心肌和骨骼肌中貯存和分配氧的胞內(nèi)蛋白質(zhì)。1960年,英國科學(xué)家肯德魯(John Kendrew)用X射線衍射法測定了來自抹香鯨的肌紅蛋白的三級結(jié)構(gòu)。這一發(fā)現(xiàn),使他成為1962年諾貝爾化學(xué)獎的獲得者之一。

  大多數(shù)人都有醫(yī)院照X光的體驗,X射線衍射法相當(dāng)于是給結(jié)晶后的蛋白質(zhì)拍X光,拍出的是一幅蛋白質(zhì)晶體原子尺度的三維結(jié)構(gòu)圖。

  在建筑外觀呈鸚鵡螺形狀的上海光源里,有5條光束線和6個實驗站(五線六站)用于蛋白質(zhì)科學(xué)研究。五線六站包括4個X射線實驗站和兩個紅外光譜實驗站,它們構(gòu)成了上海設(shè)施的蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)分析系統(tǒng)和動態(tài)分析系統(tǒng)。

  記者來到五線六站時,上海光源處在停光檢修期,復(fù)合物晶體線站負(fù)責(zé)人秦文明正在進行設(shè)備調(diào)試,為第二天的復(fù)工做好準(zhǔn)備。排成一長溜的設(shè)備間和操作間由厚重的屏蔽門把守,機器的轟鳴聲給人置身工廠車間的感覺。

  國家蛋白質(zhì)科學(xué)中心·上海(籌)副主任張榮光,是五線六站的負(fù)責(zé)人。2009年回國之前,他在美國阿貢國家實驗室工作近20年。阿貢的APS(先進光子源)是世界上先進的同步輻射中心之一,采用X射線衍射法在半小時內(nèi)測定蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)曾是阿貢的驕傲。在五線六站,這一時間被縮短為幾分鐘。

  “我們安裝了先進的衍射儀和探測器,收集全套數(shù)據(jù)zui快只需36秒,接著使用自建的軟件系統(tǒng),不到5分鐘就能完成對數(shù)據(jù)的處理和分析,給出蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)。”張榮光表示,五線六站不僅配備了世界*的硬件設(shè)施,在實驗方法和自動化上也有了很大程度的改進和提升。

  過去,科研人員帶著蛋白質(zhì)晶體樣品來到線站做實驗非常忙碌。因為不能確定收到的數(shù)據(jù)是否有用,針對同一個晶體樣品,要反復(fù)不停收集多套數(shù)據(jù),帶回去做進一步分析。

  “現(xiàn)在很快就能看到結(jié)果,一次可以帶上一批樣品來線站做實驗,節(jié)省了大量的時間和人力。我們的目標(biāo)是,用戶帶到線站上來的是晶體,帶回去的是蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。”張榮光說道。

  核磁共振拼搭蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)“積木”

  不是所有的蛋白質(zhì)在純化后都能順利結(jié)晶。結(jié)晶了的蛋白質(zhì)也可能由于晶體質(zhì)量等原因,難以被X射線“看清”。此外,同步輻射產(chǎn)生的X射線能量很高,小一點的晶體在被它探測時有“粉身碎骨”的風(fēng)險。

  在晶體學(xué)力所不及的領(lǐng)域,同樣借助X射線設(shè)立的生物小角線站能彌補一二。事實上,溶液狀態(tài)下的蛋白質(zhì)表現(xiàn)得更為“動態(tài)”和“真實”。小角線站負(fù)責(zé)人李娜介紹,小角散射技術(shù)能快速捕捉到溶液狀態(tài)下蛋白質(zhì)的瞬時結(jié)構(gòu)。只需要秒量級,甚至毫秒量級的時間,就能看見兩個分子是否形成復(fù)合物。

  分辨率不高是小角散射的不足之處。張榮光進一步解釋說,就像從遠處看兩個人的位置關(guān)系一樣,能看清他們是靠在一起,但具體是手牽手,還是腳靠腳,就不得而知了。要在溶液狀態(tài)下看清原子尺度的細節(jié)和運動,就要靠核磁系統(tǒng)了。

  離開五線六站,記者來到了上海設(shè)施的核磁共振實驗室。藍色塑膠地板上,分布著5臺白色圓柱狀的“大家伙”。其中,體型zui大的900兆核磁共振譜儀是目前國內(nèi)在使用的zui高場強的超導(dǎo)磁體設(shè)備之一。為了方便把樣品放入儀器頂部,還專門搭建了高約四五米的扶梯。

  和光束線站、電鏡等設(shè)施的直接成像相比,核磁共振掃描得到的是“間接”信息——蛋白質(zhì)分子里每2個氫原子之間的相對距離,據(jù)此勾勒出蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)。對此,核磁系統(tǒng)技術(shù)主管劉志軍打了個形象的比方:一個坐著的人,如果能測算出他的頭、手、腳等部位兩端的距離,就能畫出他的大致輪廓。

  “也可以理解為,核磁共振掃描得到的是一盒子拼插積木,接下來的事情就是把積木一塊塊地搭建起來,難點就在于不知道這些積木分屬于哪個部位,是頭還是腳,需要先指認(rèn),再通過計算來還原成三維結(jié)構(gòu)。”劉志軍說。

  為了“指認(rèn)”方便,劉志軍和他的同事們正在構(gòu)建一個大的數(shù)據(jù)庫。理想狀態(tài)是,核磁共振掃描溶液狀態(tài)下的蛋白質(zhì)后得到的實驗信息,可以去數(shù)據(jù)庫中進行對比,如果有類似的“片段”,就可判斷出這塊“積木”屬于哪個部位,再進一步去還原。“搭積木的效率高低,取決于已知信息的多少,還原蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)也是如此”。

  蛋白質(zhì)研究為藥物研發(fā)鋪路

  蛋白質(zhì)(protein)的概念zui早由瑞典化學(xué)家永斯·雅各布·貝采利烏斯在1838年提出。“protein”源自希臘文“protos”,意為“*的,首要的”。其時,人們對于蛋白質(zhì)在機體中的核心作用并不了解。

  一直到上個世紀(jì)40年代,在美國的教科書里,蛋白質(zhì)被認(rèn)為都長著一副橄欖球的模樣,為細胞提供黏稠度是它主要甚至*的功能。隨著DNA(脫氧核糖核酸)雙螺旋結(jié)構(gòu)的提出和*原子尺度的蛋白分子三維結(jié)構(gòu)圖的呈現(xiàn),分子生物學(xué)時代的大幕開啟,人們開始逐漸摸清蛋白質(zhì)的“長相”和“秉性”。

  細胞是生命體的基本單位。在構(gòu)建細胞結(jié)構(gòu)、生物催化、物質(zhì)傳輸?shù)确矫妫鞍踪|(zhì)發(fā)揮著重要的作用。生物體新陳代謝幾乎離不開的催化劑——酶,絕大多數(shù)都是蛋白質(zhì)。

  然而,和DNA測序、基因組研究的耳熟能詳相比,蛋白質(zhì)研究似乎略顯低調(diào)。事實上,蛋白質(zhì)研究可視作基因研究的姊妹篇。雷鳴以肺癌為例說道,過去肺癌病人都用一種藥物治療,現(xiàn)在看來并不科學(xué)。盡管結(jié)果都表現(xiàn)為肺癌,但從分子尺度分析,發(fā)病機理千差萬別。

  上游致病的基因多種多樣,不同基因組會產(chǎn)生數(shù)百種或數(shù)千種蛋白質(zhì)組合,形成不同特質(zhì)的癌細胞。每一種組合背后的原因也不盡相同,因為基因的表達方式錯綜復(fù)雜,同一個基因在不同條件、時期可能會起到*不同的作用。如何找到的治療靶點成為棘手的難題。

  “通過測序能知道多少種基因變,分析出主要矛盾是哪個,但基因檢測只能用于診斷,給不了治療的藥物,下一步需要借助于蛋白質(zhì)科學(xué)研究,為生物制藥提供對癥的‘靶點’。在未來,醫(yī)療有望給每一種不同亞型的癌癥患者提供有針對性的藥物。”雷鳴表示。

 

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